CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針

CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針

產品描述

CFDA-SE分子式為C₂₉H₁₉NO₁₁，分子量為557.47，CAS號為150347-59-4，CFDA SE英文名是Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，CFDA-SE可用于細胞示蹤，也可用于細胞增殖檢測。CFDA SE可以通過完好的細胞膜，進入細胞后被細胞內的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以隨機地(spontaneously)、不可逆地和細胞內蛋白的賴氨酸殘基（Lysine）或其它氨基發生結合反應，并標記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時，即可充分標記細胞。被CFDA SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩定，標記時間可達數個月。

CFDA, SE標記細胞呈綠色熒光，檢測時的激發波長可以選擇488nm激發，發射波長為518nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 檢測通道。除了流式細胞儀檢測細胞增殖外，還可用熒光酶標板定量活細胞數目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。

CFDA-SE標記的分裂細胞每分裂一次，子代細胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細胞，分裂一次的細胞熒光強度減半(1/2)，分離兩次的細胞熒光強度再減半(1/4)，以此類推，熒光強度按照1/2，1/4，1/8，1/16的規律逐漸遞減。采用CFDA SE通過流式細胞儀檢測獲得的檢測結果每一個峰代表一種分裂次數的細胞，從右至左的峰通常依次為分裂0次、1次、2次、3次等次數的細胞。分裂次數較多后，分裂0次或1次等沒有分裂或分裂次數較少的細胞會逐漸減少直至檢測不到。CFSA，SE可檢測分裂次數多達八次甚至更多。經CFDA, SE標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。CFDA, SE常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可用于成纖維細胞，自然殺傷細胞，造血祖細胞等其他細胞的增殖檢測。CFDA SE如果和其它熒光探針聯用，可以獲取不同分裂次數細胞的其它相關信息。我們的CFDA SE探針產品以25mg粉末包裝的形式提供。

運輸與保存方法

常溫運輸，-20℃干燥避光保存，保質期24個月。避免反復多次凍融。

使用方法

1.保存液配制（5mM）

按需配制，如取DMSO 360μL，溶解1mg CFSE，超音波溶解，得到5mM CFSE保存液；將其按40μL體積分裝于避光的無菌凍存管中，-20℃可保存2個月。

注意：CFSE遇水容易分解，所以在配置時候要用無水DMSO，配置后計算用量盡快使用，多余的立刻避光保存-20℃。DMSO是有機溶劑，對于蛋白質會有損傷，所以在配置的時候DMSO用量越少越好；

2. 工作液配制

取5mM的CFSE稀釋液1 ul，加入1ml 10％FCS 的PBS稀釋。

3.染色

a.重懸細胞。用有5％FCS的PBS重懸細胞，細胞濃度一般為1x1x10⁶/ml （體外實驗）或1x1x10⁷/ml（轉染實驗）。

b.染色。1ml DFSE工作液與1ml細胞懸液混合后37℃孵育5－10分鐘。期間輕輕混勻兩次（用手輕彈管壁，切忌吹打）。

c.終止染色。用完全培養液洗滌3次并離心。一般在第2次洗滌后再孵育5分鐘后進行第3次洗滌。冰冷的含10 %新生牛血清RPMI1640（先加入1ml混勻 ，然后續加入7ml）, 輕輕混勻1min（用手輕彈，切忌吹打）,1 500 r/ min 離心5 min。

d.流式細胞儀在FL1通道檢測。